Zeocin是Phleomycin D1的商业名称，是从Streptomyces verticillus（轮枝链霉菌）突变株培养肉汤中分离到的一种铜螯合的糖肽抗生素，属于bleomycin（博莱霉素）家族，在细菌、植物细胞和哺乳动物细胞上都能发挥活性。Zeocin最重要的应用是用于筛选携带Sh ble基因的转染细胞。

Invivogen公司是Zeocin（盐酸博莱霉素）生产商

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Invivogen公司产品推荐使用浓度：
1、大肠杆菌
Zeocin抗性的转化子可以在低盐LB琼脂糖培养基(yeast extract 5g/l, Tryptone 10g/l, NaCl 5g/l, Agar 15g/l,pH 7.5)，25ug/ml Zeocin的条件下筛选。invivogen公司的FastMedia™ Zeo培养基可助您得到最佳筛效果。
2、哺乳动物

Invitrogen（Thermo Fisher）公司Zeocin产品

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使用:
1、液体Zeocin可用于细胞培养。
2、用于筛选转化株的Zeocin浓度根据PH值和盐浓度改变。
3、PH 越高，盐浓度越低Zeocin活性越大。
4、普通大肠杆菌菌株筛选可在25 µg/ml zeocin浓度的低盐LB琼脂培养基中进行，PH 调至7.5 。
5、动物细胞筛选：根据不同细胞系从100 到 750 µg/ml 。
6、植物细胞筛选：根据不同的细胞种类和培养基从50到250µg/ml 。
7、酵母筛选：取决于种属和培养基，S. cerevisiae Sh ble 转化株在50µg/ml浓度的YPD培养基中筛选，PH7.0.

举例：
构建融合Zeocin和GFP双筛选标记质粒pcB-Zeo-GFP。方法质粒LeCo-G／Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段，通过PCR反应、BamHI酶切后连接替换空白质粒pCB的筛选基因gpt，通过菌落PCR，酶切图谱分析及测序分析鉴定重组质粒，构建成功后将其与野生型痘苗病毒进行位点特异性同源重组，经Zeocin药物筛选2代后，用流式细胞仪观察重组痘苗病毒GFP表达。结果经菌落PCR，1号、5号和10号菌落中扩增出426bp的目的条带，与预期的大小完全一致，经酶切分析和DNA测序进一步验证了重组质粒pCB-zeo-GFP；该质粒与野生型痘苗病毒同源重组，得到了重组的痘苗病毒；Zeocin筛选2代后，病毒上清感染细胞，流式细胞分析7.18％的细胞中有GFP的表达，而阴性对照仅有1.43％；Zeocin药物筛选5代后，通过激光共聚焦可在80％以上的细胞中观察带GFP；提取的重组痘苗基因组DNA也扩增出预期大小目的条带。结论含Zeocin和GFP双筛选标记的新型重组痘苗病毒不仅具有可观察性且具有药物抗性，非常容易进行筛选鉴定。

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