一、嘉美实验 CRISPR/Cas9 载体系统介绍
嘉美实验拥有完善的 CRISPR/Cas9 载体系统，包括单敲除，双敲除，缺口酶、慢病毒敲除载体和敲除载体库等体系。并且每一个载体系统都有不同的标签（EGFP/RFP/Puro/Neo）可供选择。同时，拥有 100 余种基因敲除的项目经验，可以快速、准确、高效的完成任何一个基因敲除的项目。

二、实验步骤
1、设计针对 Atg10基因的 gRNA并克隆到嘉美实验的 pGK1.1敲除载体中；

2、电转 pGK1.1（Atg10）载体至 K562细胞中；

3、Cruiser™酶切计算突变率（图1）；

4、单克隆筛选用 Cruiser™酶切验证获得潜在阳性克隆（图2）；

5、对潜在的阳性克隆进行测序验证，获得纯合子；

图1. Cruiser™酶切细胞池，计算突变率。

图3. 潜在阳性克隆测序比对结果
根据潜在阳性克隆单克隆测序验证结果，判断该株疑似阳性克隆的两个亲本都缺失11bp碱基，该株阳性克隆为纯合子敲除细胞株。